隨著畜禽養殖業規模化、集約化和商品化程度的增高，畜禽流動和引種工作的頻繁，一些疾病的發生、發展變得越來越復雜。一些疫病屢控不止，時有起伏；部分傳統疫病非典型化且臨床癥狀日漸復雜；新的病毒感染性疫病日漸增多；一些傳染病的免疫失敗經常發生，引起獸醫工作者極大的關注。豬瘟是嚴重危害養豬業最古老的疾病之一，近年來，非典型化豬瘟逐漸增多。豬偽狂犬病(PR)自1902年首先在匈牙利發現以來，世界上已有50多個國家存在，我國有20多個省、市流行本病，近來呈不斷蔓延之勢。豬藍耳病又稱豬繁殖和呼吸綜合征(PRRS)，可感染各種年齡階段豬。自1987年在美國首次發現以來，隨后加拿大、德國、荷蘭、英國、法國、日本等陸續報道本病流行。我國除臺灣外，1996年才報道，但短短幾年時間，很多省份都報道本病不同程度存在。近來，很多大型豬場均發生以母豬流產、產死胎、弱仔、木乃伊胎等病例，大多由該病原引起。為了摸清規模豬場中豬瘟抗體水平和免疫狀況，豬偽狂犬病、豬藍耳病陽性率和分布情況，有重點地開展相應的免疫預防，我們檢測了杭州市24個規模豬場911份血清中的豬瘟、豬偽狂犬及豬藍耳病抗體，現報道如下。
1 材料和方法
隨機取樣，采自杭州地區24個規模養豬場(未經豬偽狂犬病及豬藍耳病疫苗免疫)，其中母豬血清621份，肥育豬207份，種豬(此處專指種公豬，以下同)83份，血清分離后置冰箱2l℃保存備用。
豬瘟正向間接血凝抗原、陰性和陽性血清，購自中國農科院蘭州獸醫研究所，試劑批號為：2001019。
豬偽狂犬病、豬藍耳病ELISA診斷試劑盒購自美國IDEXX公司，試劑批號為06685-330FT和09265-089HT。
96孔血凝板，購自浙江華東醫藥公司。
豬瘟血清抗體水平的檢測，采用正向血凝試驗。具體操作步驟如下：即在％孔血凝板上，每孔加入50ul稀釋液，每排第1孔加入待檢血清50ul，遞比稀釋待檢血清至血清濃度為1：512，最后50ul丟棄。再在每孔加入抗原診斷液25ul，置濕盒中于25℃孵育1.5-3h，判定結果。
判定標準：凡能使50％的紅細胞凝集的血清最大稀釋倍數為該份血清的抗體效價，豬瘟血清抗體效價高于或等于1：16視為免疫合格。
豬偽狂犬病、豬藍耳病抗體檢測參照美國IDEXX公司ELISA診斷試劑盒說明書進行。待檢血清分別作1：20(豬偽狂犬病抗體檢測)和1：40(豬藍耳病抗體檢測)稀釋。取稀釋好的待檢血清100ul加入包被好的96孔聚苯乙烯診斷試劑盒中，置濕盒內25℃作用30min，取出，用洗滌液充分洗滌3-5次，甩盡殘留液體，每孔加入酶標抗體100ul，濕盒內2.5℃作用30min，洗滌。再在每孔中加入TMB底物溶液100ul，濕盒內25℃；作用15min后，加入終止液100ul，立即置BIO-RAD550型酶標儀上650nm處測定。分別按所附計算公式判定是否為血清抗體陽性。
2 結果
2.1豬瘟的免疫狀況
母豬、肥育豬、種豬豬瘟血清抗體效價如表1所示。在所測試的608份母豬血清中，有3份(0.49％)血清樣品檢測不到豬瘟抗體，45份樣品豬瘟血清抗體低于1：8，占檢測總數的7.4％；有563份樣品豬瘟血清抗體大于或等于1：16，占92.6％；在所測試的157份肥育豬血清中，大于或等于1：16的血清份數為98，免疫合格串為62.4％；78份種豬血清中，有61份血清抗體水平高于或等于1：16，占總數的韶.2％。豬瘟免疫合格率排列順序為母豬>種豬>肥育豬。
豬血清中豬瘟抗體效價分布和免疫效果。在所有的843份豬血清中，有5份豬瘟血清抗體效價為0，占總數的0.6％，有722份豬瘟血清抗體水平高于、等于1：16，免疫合格率為85.64％。所調查的24個大型豬場，豬瘟免疫效果相差較大，免疫合格率為57.14％―100％不等。但絕大多數場免疫水平較高，有14個豬場豬瘟免疫合格率大于或等于90％。以豬場豬免疫合格率大于80％以上計為豬場免疫合格，則有凹個豬場豬瘟免疫合格，占83.33％。
可見，規模豬場豬瘟的免疫效果還是比較好的，具體結果見表1、2。
表1 母豬、肥育豬和種豬豬瘟血清抗體效價及其分布
抗體 血清份數 所占百分比／％
效價 -------------------------- ---------------------------
母豬 肥育豬 種豬 合計 母豬 肥育豬 種豬 平均
1:0 3 2 5 0.5 1.3 0 0.6
1:2 3 2 1 6 0.5 1.3 1.3 0.7
1:4 5 19 8 32 0.8 12.1 10.3 3.8
1:8 34 36 8 78 5.6 22.9 10.3 9.3
1:16 58 38 15 111 9.5 24.2 19.2 13
1:32 86 24 8 118 14.1 15.3 10.3 14
≥1:64 419 36 38 493 68.9 22,9 48.7 58.5
合計 608 157 78
表2 24個規模豬場豬瘟免疫狀況
免疫合格率／％ 豬場數 占百分比／％
-----------------------------------------
90-100 14 58.3
80-90 6 25
70-80 1 4.2
60-70 1 4.2
≤60 2 8.3
2.2 豬偽狂犬病抗體陽性檢出率
在所檢測的24個規模場中，共有20個場檢測出偽狂犬病抗體，占總數的83.33％。911份血清中，365份血清呈偽狂犬病抗體陽性，占整個檢測樣品的40.07％，其中母豬、肥育豬、種豬偽狂犬病抗體陽性率分別為50.24％、29％、24％。
具體結果見表3。
表3 PRV及PRRSV血清抗體陽性檢出率
豬種 PRV抗體 PRRSV抗體
----------------------- --------------------
陽性數 陽性率／％ 陽性數 陽性率／％
母豬 312 50.24 220 35.4
肥育豬 29 14.01 100 48.3
種豬 24 28.9 42 50.6
合計 365 40.07 362 39.74
2.3 豬藍耳病抗體陽性檢出率
24個規模場中，共有17個場檢測出藍耳病抗體，場陽性率達70.33％。在911份血清中，豬藍耳病抗體陽性份數為362份，占39.74％，與偽狂犬病相差無幾。其中母豬、肥育豬、種豬陽性率分別為35.4％、48.3％、50.6％。具體見表3。
3 討論
本研究表明，從整體上看豬瘟的免疫狀況較好，以豬瘟抗體間接血凝價在1：16以上時能抵抗強毒感染為參考，大多數豬場和豬群能達到這個水平。但也有部分豬場的少數豬，豬瘟抗體滴度低下，不足以抵抗強毒侵襲而發病或成為隱性帶毒者，威脅易感豬群。這可能與豬瘟疫苗免疫程序不合理和免疫質量不好有關。
調查中發現，豬偽狂犬病抗體陽性場達20個，占整個調查場數的83.33％。其中母豬抗體陽性率非常高，為50.24％，種豬、肥育豬分別為14.01％和28.9％，情況非常嚴峻。近期，很多豬場均發生以母豬流產、產死胎、木乃伊胎、弱仔及仔豬出生后幾日內急性死亡病例，經診斷大多為此病引起。由于偽狂犬病可感染各種年齡階段豬，又可致豬隱性帶毒；近來，其毒力和侵襲力有呈動態的持續漸增趨勢，并且，病毒的傳染鏈中有鼠類參與，給凈化和凈化保持帶來了相當的難度。實驗室和田間試驗都已證明PR野毒間、野毒與活苗毒株有重組現象。有些場采用滅活苗和基因缺失苗免疫接種，效果欠佳。但不論怎樣，小群內清除感染，使用基因工程致弱活毒苗及相容的血清學試驗來區分疫苗抗體和野毒感染誘導產生的抗體是必要的。總的來說，對豬偽狂犬病陽性豬場和受威脅豬場建議使用疫苗，但應同時加強血清抗體監測，監測疾病流行情況和發病區域。非流行場應以清除感染豬只為主，加強凈化。
前幾年我省較為少見的豬藍耳病，近來發病率漸增。此次調查顯示，24個規模養殖場，豬藍耳病抗體陽性場達17個。在所調查的911頭豬血清樣品中，母豬藍耳病抗體陽性率為35.4％，肥育豬為48.3％，種豬為50.6％。由于本病主要引起豬繁殖障礙，癥狀易與豬偽狂犬病、豬瘟混淆，病毒易于扁桃體、上呼吸道和肺泡內巨噬細胞和樹突狀細胞內寄生復制，降低豬體免疫力。進而繼發或伴發其他病原微生物如衣原體、豬鏈球菌、副嗜血桿菌、豬放線桿菌等感染，加劇病情，導致臨床癥狀變化多樣、死亡率升高，給本病的確診帶來很大困難。PRBS病毒在扁桃體和肺內可存在3周到1年的時間，康復豬通過呼吸道、唾液腺、糞便、尿及精液散毒。在以后的3-6個月或更長的時間內可能成為其他豬感染的來源，造成該病的持續存在。因此，加強對該病的診斷試劑和防制措施的研究乃當務之急。目前，對該病的防治由于無特效藥，仍以預防為主。同時，PRRSV是抗體依賴性感染病毒，因此，在生產中盲目使用疫苗特別是弱毒疫苗是不可取的。應加強豬群的血清學監測，特別是引種過程中的檢測，堅持豬群全進全出制，嚴格隔離、檢疫、消毒工作，逐步淘汰陽性豬，進而達到凈化目的。