畜牧業是一個承工啟農的 中軸產業, 既可促進種植業, 又能帶動加工業和服務業, 形成農業內部產業和三次產業間的良性循環, 促進農產品的轉化增值。近年來, 我國畜牧業呈現出加快發展勢頭, 截至2009 年, 畜牧業產值已占農業總產值的34%, 畜牧業發展快的地區, 畜牧業收入已占到農民收入的40% 以上, 畜牧業已由傳統的家庭副業發展成為農村經濟的主導產業和農民增收的重要渠道, 但動物傳染性疾病診斷、食物添加劑、藥物殘留等方面存在的問題制約著畜牧業向更深層次發展。酶聯免疫吸附測定法( Enzyme- Linked Immunosorbent A ssay, ELISA) 是免疫學診斷中的一項新技術, 由于其具有快速、敏感、簡便、易于標準化等優點 。隨著單克隆抗體技術的發展應用及免疫試劑盒的商業化, ELISA 不但應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫學診斷, 也應用于分子抗原和抗體的測定, 其應用范圍日益擴大, 目前ELISA 已廣泛應用于臨床醫學、生物化學、分析化學、食品分析等領域, 但在畜牧業方面的應用, 國內目前尚未廣泛使用。本文通過對ELISA 在畜牧行業中應用的介紹, 旨在促進該技術在畜牧行業的應用和推廣。
1 ELISA 的原理、特點及分類ELISA 的理論基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。固相載體表面的抗原或抗體包被后可保持其免疫學活性, 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性, 又具有酶的活性。在測定時,受檢標本( 測定其中的抗體或抗原) 與固相載體表面的抗原或抗體發生免疫反應, 洗滌后, 可使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開, 再加入酶標記的抗原或抗體, 也通過特異反應而結合在固相載體上, 這時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定比例, 加入酶反應底物后, 底物被酶催化成為有色產物, 產物的量與標本中受檢物質的量直接相關, 故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA 技術與經典的化學、生物學的檢測方法比較, 具有以下特點: 敏感性強, 檢測限可達ng 甚至pg 水平, 可作定量測定; 外界干擾小、抗原抗體的免疫反應特異性高, 非特異性反應少, 結構類似物、有色物質等對檢測的干擾很小; 操作簡便快捷、檢測速度快, 由于特異性強, 簡化了樣品的預處理和提取純化過程, 一次可檢測大批標本; 安全性高, 污染少, 因為靈敏度高, 標準品的濃度可以很低, 有機溶劑用量較少, 減少對檢測人員和環境的潛在危害。是當前發展最快、最容易、試劑盒應用最廣的一項新技術,目前已被廣泛用于各種疾病的實驗室診斷。在實際應用過程中, ELISA 經不斷改進, 根據試劑的來源、標本的情況及檢測的具體條件, 設計出各種不同類型的分析方法, 目前主要有: 雙抗體夾心法測抗原、雙抗原夾心法測抗體、間接法測抗體、競爭法測抗體、競爭法測抗原、捕獲包被法測抗體等多種方法。