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飼料產品質量安全檢測方法大全

2013-11-14 飼料人才網
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2.2 以檢測DNA 為基礎的方法
    以DNA為基礎的檢測技術主要有核酸探針雜交、DNA指紋分析、PCR-RELP分析、PCR特異擴增(常規PCR方法和Real-timePCR方法)。主要原理都是對各種物種內特異的核酸序列進行提取、鑒定,從而判定飼料內有無該物種的成分。其中PCR特異擴增方法由于其簡單、快速、特異性強的特點,成為目前最廣泛應用的方法,特別是熒光PCR的應用使得檢測的特異性和敏感性更高。我國也于2008年4月1日頒布實施了應用PCR方法定性檢測動物源性飼料中動物成分的標準,包括駱駝源性成分、狗源性成分、哺乳動物源性成分、豬源性成分、兔源性成分、鹿源性成分和馬、驢源性成分的PCR定性檢測,為進一步規范和監督動物源性飼料的安全使用提供技術支持。
    Cawthraw等(2009)應用實時PCR測定動物飼料中禁用的哺乳類及禽類成分,飼料中含有1%的肉骨粉時檢測其中的16SrRNA可以進行鑒別。用mtATP6作為靶序列,應用PCR探針技術檢測飼料中的豬源成分,以PPA8和PPA6作為檢測DNA,檢出限可以分別達到0.01%和0.001%,這種方法已經在日本的飼料檢測中應用(Shinoda等,2008;Yoshida等,2009)。
2.3 微生物的檢測
    飼料中污染微生物的危害主要產生在以下四個方面,一是含有致病性微生物如沙門氏菌、志賀氏菌、致病性大腸桿菌等而使動物產生疾病;二是微生物的繁殖使某些營養成分如脂肪、動物蛋白產生腐敗作用;三是非致病性微生物寄生于飼料中,消耗飼料中的養分,使飼料營養價值下降;四是某些微生物會產生毒素如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、肉毒毒素、金黃色葡萄球菌腸毒素等,動物食用含有這些毒素的飼料后會產生危害。目前微生物的檢測技術發展很快,利用了包括微生物學、分子化學、生物化學、生物物理、免疫學和血清學等領域的知識,其目的是建立可用于微生物計數、早期診斷、鑒定等方面的快速檢測技術。除常規的平板培養外,目前已有商品化的基因探針試劑盒,如GENE-TRAKSystemsDNA雜交篩選法(AOAC方法:987.10,990.13)。李斯特氏菌、沙門氏菌、彎曲桿菌等均有DNA探針的試劑盒。目前,已經有了全自動化的PCR檢測試劑盒及儀器,如美國杜邦快立康公司的BAX病原菌檢測系統。可用于檢測沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7等致病菌。熒光酶免疫分析篩選方法是在EIA基礎上加入熒光標記的酶底物,用熒光計檢測熒光度值來判斷結果。如沙門氏菌熒光酶免疫分析研究篩選方法是基于EIA測定沙門氏菌抗原。沙門氏菌多克隆免疫色度分析篩選方法已有許多試劑盒,由澳大利亞BioenterrisesPtyLtd和美國BioControlSystems,Inc研制的多克隆免疫試劑盒,都已獲AOAC認可。Koyuncu等(2010)建立了以PCR為基礎的商業化沙門氏菌enterica檢測,當每25g飼料中含有1個沙門氏菌enterica時的檢測結果與培養法相近,該方法與平板培養的靈敏度及專屬性基本一致。但也會有一些PCR檢測陽性的飼料中并不能分離出沙門氏菌,因此PCR方法目前還不能完全替代平板培養法,但可以用來進行流行病學調查研究的方法。

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